三聚氰胺是一種重要的氮雜環(huán)有機(jī)化學(xué)原料。水溶液呈弱堿性，可溶于甲醇、乙酸等，微溶于水和乙醇，不溶于乙醚、苯等。C-18柱上保留很 差。利用這一特性，人們通常使用離子檢劑液相色譜法和液質(zhì)聯(lián)用法。但由于食品基質(zhì)復(fù)雜，樣品的處理至關(guān)重要。我們采用三酸提取、固相提取小柱凈化，輔以固相提取器操作，建立了一套快速、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好的樣品外觀方法。

主要儀器和試劑

高效液相色譜儀、四元梯度泵、在線真空脫氣器、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱、二極管陣列檢測器、固相提取器、超聲波清洗器、離心機(jī)、固相提取柱：OASIS MCX，6mL，500mg。純度99%的三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)產(chǎn)品。

樣品處理

提取:準(zhǔn)確稱取粉碎混合樣品5.0g，加入50mL 1%三氯乙酸溶液及2 mL 乙酸鉛溶液2%，超聲提取30%min，高速離心后，取上清液凈化。

凈化:固相提取小柱(6mL，500mg)在固相提取儀樣品架上加5個(gè)mL甲醇、5mL水活化，然后準(zhǔn)確移除5.0mL離心液上柱?；罨吧?樣品架通過調(diào)整面板旋鈕將樣品架提升到頂部N氣流小，控制流速不超過1mL/min。然后再用5mL水、5mL甲醇洗滌SPE 柱，棄去洗脫液，將小柱升至頂部調(diào)節(jié)氣閥旋鈕，自動(dòng)加壓吹干小柱，用5%氨甲醇溶液5%mL用氮吹器吹干洗脫液，用甲醇-水(2:8，V/V)定 容至1.0mL,過0.45μm上機(jī)測量濾膜。

提取和凈化樣品

三氯乙酸具有沉淀乳及其產(chǎn)品中蛋白質(zhì)的作用，有助于溶解三聚氰胺.因?yàn)槿矍璋肥侨鯄A性的。(弱陽離子化合物)利用陽離子交換柱進(jìn)行凈化，可以去除雜質(zhì)，提高檢測靈敏度、再現(xiàn)性和回收率。

固相提取器的應(yīng)用

目前國內(nèi)好的固相萃取儀有鼎泰恒勝、海能等，具有高效、簡單的特點(diǎn)。它可以通過裝置中的氣流調(diào)節(jié)閥來控制小柱的流量，并可以直接吹干小柱，以確保每個(gè)小柱在活化洗脫過程中都有良好的再現(xiàn) 性。并且可以配套不同規(guī)格的固相提取柱(如1)mL，3mL，6mL等)一次操作可同時(shí)處理48個(gè)樣品。我們在奶粉中添加(2).0～50.0) ug/mL對不同濃度的三聚氰胺進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)回收和再現(xiàn)實(shí)驗(yàn)，回收率在95~99%之間。相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于3%。

結(jié)論

固相提取器的加壓操作是在固相提取柱上方施加一定的壓力空氣N2來實(shí)現(xiàn)。

這樣可以加快過濾速度，控制柱的活化、洗滌和洗滌的整個(gè)過程，使溶液容易進(jìn)入固定相孔，有利于樣品與固定相的緊密接觸，從而提高提取效果。它克服常規(guī) 手動(dòng)固相提取操作耗時(shí)，不能保證流量穩(wěn)定，不同人員操作結(jié)果偏差大，通過簡單控制消除人工操作誤差，確保在短時(shí)間內(nèi)處理數(shù)十個(gè)樣品，重現(xiàn)良好。